Determinazione di u cuntenutu di l'acidu ossalicu in frutti è ligumi per cromatografia liquida à alte prestazioni (HPLC)

Determinazione di Acidu Ossalicu Cuntenutu in Frutti è Ligumi per Cromatografia Liquida à Alte Prestazioni (HPLC)
1. Principiu sperimentale è cuncepimentu di u metudu
Cum'è un acidu organicu cumunu in frutti è ligumi, u cuntenutu di l'acidu ossalicu affetta direttamente u gustu è u valore nutrizionale di l'alimentu. Questu esperimentu usa a cromatografia liquida à alte prestazioni in fase inversa (RP-HPLC). In cundizioni di fase mobile acida, l'acidu ossalicu hè separatu à basa da e sustanze interferenti utilizendu una colonna cromatografica C18. Un rilevatore ultraviolettu impostu à 210 nm hè utilizatu per l'analisi quantitativa, basata nantu à e caratteristiche di assorbimentu UV di i gruppi carbossilici in e molecule di l'acidu ossalicu.
2. Curva Standard è Preparazione di u Campione
Un metudu di diluzione in gradiente hè utilizatu per preparà suluzioni standard: pesate accuratamente 25,0 mg di diidratu di l'acidu ossalicu è diluite à 25 mL cù acqua ultrapura per ottene una soluzione madre di 1 mg/mL. Questa hè diluita sequenzialmente in una seria di soluzioni standard à 50, 100, 200, 400 è 800 µg/mL, cù ogni concentrazione iniettata in triplicatu.
Per a preparazione di u campione, si usa l'estrazione assistita da microonde: pesate 5,00 g di omogeneizatu di frutta/verdura, aghjunghjite 10 mL di soluzione d'acidu cloridricu 0,1 mol/L, trattate à 60 °C cù microonde per 10 minuti, filtrate attraversu un filtru à membrana di 0,45 µm è raccogliete u filtratu per l'analisi.
3. Ottimizazione di e cundizioni cromatografiche
A fase mobile hè un sistema tampone di fosfatu di diidrogenu di potassiu 0,01 mol/L (pH 2,5)-acetonitrile (95:5), cù una velocità di flussu di 0,8 mL/min è una temperatura di colonna di 35°C. L'aghjustamentu di a proporzione di acetonitrile mostra chì quandu a fase organica supera u 10%, u tempu di ritenzione di l'acidu ossalicu si riduce à menu di 3 minuti, ma si verifica un piccu di coda. In e cundizioni finali ottimizzate, u tempu di ritenzione di l'acidu ossalicu hè di 4,2 minuti, ottenendu una separazione cumpleta da l'acidu citricu è l'acidu malicu adiacenti (risoluzione > 1,5).
4. Validazione di u metudu
A verificazione di l'intervallu lineare mostra una bona relazione lineare trà l'area di u piccu è a cuncentrazione in l'intervallu di 10-1000 µg/mL (R² = 0,9993). U limite di rilevazione (LOD), determinatu da u metudu di u rapportu segnale-rumore, hè 0,5 µg/mL. In i testi di ripetibilità, l'RSD per sei determinazioni replicate di u listessu campione di spinaci hè 1,8%. L'esperimenti di recuperu di spike à trè livelli (80%, 100% è 120%) producenu recuperi medii di 98,2%, 102,4% è 97,8%, rispettivamente, chì rispondenu à i requisiti per l'analisi quantitativa.
5. Analisi di Campioni Veri
Sei frutti è ligumi dispunibili in cummerciu sò stati testati: spinaci (356 ± 12 mg/100 g), sedanu (215 ± 9 mg/100 g), pumata (18 ± 2 mg/100 g), mela (6 ± 1 mg/100 g), banana (micca rilevata) è broccoli (89 ± 5 mg/100 g). Un paragone cù u metudu standard naziunale (GB 5009.277-2016) mostra chì a deviazione relativa trà i dui metudi hè inferiore à u 5%, verificendu l'affidabilità di stu metudu. In particulare, u metudu HPLC mostra una sensibilità più alta cà i metudi di titrazione tradiziunali quandu si analizanu campioni à bassu cuntenutu.
6. Note chjave
Cuntrullà strettamente u valore di pH durante u pretrattamentu di u campione. Se u pH di l'estrattu supera 3, a precipitazione di ossalatu di calciu porterà à risultati di test bassi. A fase mobile deve esse preparata fresca ogni ghjornu per evità a precipitazione di sale è u bloccu di a colonna. Dopu ogni 20 iniezioni, sciacquate a colonna cù acetonitrile-acqua (30:70) per 30 minuti per impedisce a degradazione di l'efficienza di a colonna. Per i campioni chì cuntenenu pigmenti (per esempiu, cavulu viola), hè cunsigliatu di aghjunghje una tappa di purificazione di estrazione in fase solida prima di l'iniezione.
7. Indicazioni di Applicazione è Espansione
Stu metudu pò esse allargatu à a rilevazione di l'acidu ossalicu in campioni biologichi cum'è l'urina è u sangue. Aghjustendu a cumpusizione di a fase mobile (per esempiu, aghjunghjendu idrossidu di tetrabutilammoniu), l'acidu ossalicu è i so metaboliti ponu esse determinati simultaneamente. Cumbinatu cù un rilevatore di spettrometria di massa, si pò stabilisce un metudu di rilevazione di tracce più precisu. In l'industria di trasfurmazione alimentaria, stu metudu pò furnisce un supportu di dati impurtante per a selezzione di varietà à bassu cuntenutu d'acidu ossalicu è l'ottimisazione di i prucessi di cucina.